红毛丹SSR-PCR反应体系优化及多态性标记筛选

摘要

为建立适宜红毛丹SSR-PCR反应的最佳体系并筛选出具有多态性的SSR引物,采用L16(45)正交试验设计对反应体系中的各组分(模板DNA,引物, Mg^(2+), dNTPs和Taq DNA聚合酶)进行了优化,建立了红毛丹SSR-PCR的最佳反应体系(20μL):DNA模板30 ng、dNTPs 0.40 mmol/L、引物0.4μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg^(2+)1.50 mmol/L;利用优化后的SSR-PCR体系和6份红毛丹种质基因组DNA模板,从50对SSR引物中筛选出11对条带清晰、多态性丰富、重复性好的SSR引物,多态比例达22%。本研究为后续红毛丹种质资源遗传多样性分析、分子指纹图谱构建和品种鉴定等研究提供了技术参考。