美洲南瓜SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

摘要

应用单因素试验和L16(44)正交设计对影响美洲南瓜SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适合美洲南瓜SSR-PCR反应的最佳体系.结果表明,各因素不同水平对PCR反应结果均有影响,优化后的美洲南瓜SSR-PCR反应体系(20 u L)为:1.00μ mol· L-1引物、0.150mol·L-1dNTP、0.9 UTaq酶、50 ng DNA模板.运用优化后的反应体系对美洲南瓜进行多态性引物的筛选,从300对引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物68对.