水稻Ca2+依赖性核酸酶融合蛋白的构建、纯化及酶活性分析

摘要

为了进一步探究水稻(Oryzasativa)Ca^2+依赖性核酸酶基因OsCaN的功能,本研究通过PCR克隆出OsCaN,并将其插入到带有GST标签的原核表达载体pGEX-6p-3中。成功构建了pGEX-6p-3-OsCaN1、pGEX-6p-3-OsCaN3、pGEX-6p-3-OsCaN4原核表达载体,再将其转化到大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导表达融合蛋白。利用蛋白亲和层析柱对重组蛋白进行纯化并通过SDS-PAGE进行电泳检测,随后对核酸酶的酶活性进行鉴定。可以得到GST-OsCaN融合蛋白并检测出目的蛋白相对分子量约为64kD、65.5kD和82.5kD,同时确定了水稻OsCaN1、OsCaN3以及OsCaN4基因是钙离子依赖性核酸酶。本研究为后续分析水稻Ca^2+依赖性核酸酶OsCaN基因的生物学功能提供理论参考。