荧光标记中性粒细胞特异性敲除膜结合型前列腺素E2合酶-1小鼠的构建及其在静脉血栓形成中的应用

摘要

膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)是一个新型抗炎药靶,全身敲除mPGES-1不影响动脉血栓形成,抑制血管病理性重构。目的构建荧光(tdTomato)标记的mPGES-1中性粒细胞特异性敲除小鼠并鉴定其在静脉血栓形成中的应用。方法与结果人工合成基因打靶序列,包括mPGES-1同源序列、LoxP序列、Lox2272序列和tdTomato表达序列,利用CRISPR/Cas9技术将这段合成序列同源置换C57BL/6N小鼠的mPGES-1基因序列,制备转基因小鼠(mPGES-1fl/fl),将其与中性粒细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠(Lyz-Cre+)杂交获得Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠。向小鼠腹腔注射脂多糖诱导炎症,半定量PCR结果显示Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠外周血白细胞mPGES-1表达缺失,荧光显微镜观察和流式细胞分析结果表明tdTomato成功标记Lyz-Cre(+)mPGES-1fl/fl小鼠中性粒细胞。通过限制血流诱导小鼠下腔静脉血栓,荧光标记的中性粒细胞参与静脉血栓形成。敲除中性粒细胞mPGES-1不影响基础状态血液PGE2水平,但显著抑制诱导静脉血栓相关的PGE2水平上调。结论成功构建报告基因tdTomato特异性标记的mPGES-1组织特异性敲除的转基因小鼠,利用此工具鼠进一步发现中性粒细胞参与静脉血栓形成,中性粒细胞mPGES-1介导静脉血栓形成相关的PGE2合成。