梅花鹿MMP-2催化域的基因克隆及原核表达

摘要

为了研究基质金属蛋白酶2（MMP-2）与鹿茸生长发育之间的关系,构建MMP-2催化域原核表达载体,采用RT-PCR方法从鹿茸c DNA中扩增MMP-2的催化域基因,使用NdeⅠ和NotⅠ酶切位点连入原核表达载体p ET30a并进行诱导表达。结果显示：梅花鹿MMP-2的催化域与牛、山羊、大鼠、人、马、猪和绵羊等多个物种的MMP-2催化域进化上较为保守,氨基酸同源性分别为98.4%、99.5%、94.0%、96.2%、95.9%、96.4%和99.2%;重组表达的MMP-2 CD带有His标签,蛋白共有377个氨基酸,预测大小为42.04 ku,理论等电点为4.95;通过转化BL21感受态细胞和IPTG诱导,成功表达了目的蛋白,约占菌体蛋白的80%;经过SDS-PAGE检测和免疫印迹分析,发现目的蛋白主要表达在包涵体中。本试验为后续蛋白纯化及活性检测,进一步研究MMP-2在鹿茸生长中的作用提供了理论依据。