梅花鹿S100A4基因的克隆及原核表达

摘要

为研究梅花鹿S100A4蛋白在鹿茸发生中的作用机制,需要大量制备S100A4蛋白纯品.本研究从梅花鹿锯茸血细胞中提取总RNA并进行反转录,用设计的引物扩增S100A4基因,将PCR产物克隆到pMD 18-T载体并测序.S100A4基因序列同源性分析结果显示,梅花鹿S 100A4基因与牛S100A4基因同源性最高(98.4％).而后将扩增的梅花鹿S100A4基因片段和原核表达质粒pET-28a(+)分别用EcoRI和HinfⅢ进行双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21(DE3)表达菌株进行诱导表达.酶切鉴定结果表明,成功构建了表达梅花鹿S100A4基因的重组质粒pET28a-S100A4,SDS-PAGE电泳结果表明S100A4蛋白获得成功表达.本研究成功地实现了梅花鹿S 100A4基因的体外表达,为下一步研究S100A4蛋白在鹿茸生长过程中的 作用机制奠定了基础.