猪CFL2基因荧光素酶报告基因载体的构建及活性分析

摘要

为了进一步深入研究猪CFL2基因转录调控机制,通过PCR方法,从猪基因组DNA中获得CFL2基因起始密码子上游12段逐步缺失的CFL2启动子序列,分别定向克隆至含有荧光素酶报告基因的pGL4.10载体上。构建了12种荧光素酶报告基因载体:pGL4.10-222、pGL4.10-383、pGL4.10-482、pGL4.10-666、pGL4.10-912、pGL4.10-1021、pGL4.10-1093、pGL4.10-1305、pGL4.10-1369、pGL4.10-1554、pGL4.10-1680、pGL4.10-1826。以pGL4.74为内参质粒,分别瞬时转染小鼠成肌细胞C2C12、小鼠成纤维细胞NIH3T3、人宫颈癌细胞HeLa,48 h后采用双荧光素酶报告基因系统检测其启动子活性。结果表明:pGL4.10-1554(-1 502^+51 bp)的转录活性最强,初步证实-1 502^-1 317 bp区域为CFL2启动子的活性区域,从而为进一步研究CFL2的转录调控奠定了基础。