人酪氨酸羟化酶催化核心DNA片段的克隆与表达

摘要

目的获得编码人酪氨酸羟化酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＴＨ）催化核心ｃＤＮＡ片段，并观察其表达。方法采用人的全长ＴＨｃＤＮＡ为模板，设计特定的引物进行ＰＣＲ扩增反应并构建真核表达载体——质粒ｐＣＭＶＴＨＣ。在对目的片段测序后，将重组质粒转染到大鼠原代培养骨骼肌细胞内，用免疫组织化学方法检测其表达。结果获得了编码Ｎ－端缺失１４５个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的ｃＤＮＡ片段，其表达载体构建正确。插入片段的ＤＮＡ序列与人ＴＨｍＲＮＡ相应序列完全一致，将其转入肌细胞内测得有酪氨酸羟化酶表达。结论本研究结果为帕金森病的基因治疗提供了有价值的新工具。