9种固定方式对脂肪组织冷冻切片质量的影响

摘要

为了减少脂肪组织冷冻切片出现细胞破碎及形态不完整的现象,提高切片质量,试验将冷冻切片流程分为取材、前固定、包埋、冷冻、切片、后固定、H.E.染色、脱水封片、显微镜拍摄,以及图像处理与质量评判共10个操作步骤,采用3×3双因素(A×B)设计方法,A因素为前固定处理方式(不做处理、20%蔗糖固定过夜、4%多聚甲醛固定30 min),B因素为后固定处理方式[不做处理、4%多聚甲醛固定10 min、混合固定液(由甲醛、无水乙醇、冰醋酸按体积比3∶16∶1配制)固定10 min],其他操作步骤保持不变,根据脂肪细胞边界的完整性对切片质量进行评判,比较9种固定方式对脂肪组织冷冻切片质量的影响。结果表明:在9种固定方式中,前后固定处理都不进行的脂肪组织细胞破裂较多,不便于观察形态;只进行后固定不进行前固定处理或只进行前固定不进行后固定处理的脂肪组织较前后固定处理都不进行的脂肪组织细胞边界的完整性也有所提高。在后固定处理方式相同的情况下,用4%多聚甲醛(固定30 min)进行前固定处理的脂肪细胞边界的完整性较用20%蔗糖(固定过夜)进行固定处理的脂肪细胞边界的完整性更好;而在前固定处理方式相同的情况下,用混合固定液(固定10 min)进行后固定处理的脂肪组织较用4%多聚甲醛(固定10 min)进行后固定处理的脂肪细胞边界的完整性更好。用4%多聚甲醛(固定30 min)进行前固定处理并用混合固定液(固定10 min)进行后固定处理的脂肪组织细胞边界的完整性最好,切片质量优良。说明用4%多聚甲醛(固定30 min)进行前固定处理、混合固定液(甲醛∶无水乙醇∶冰醋酸=3∶16∶1)进行后固定处理可得到优良的脂肪组织冷冻切片,便于后续试验的进行。