不同粘附剂、固定液及防冰晶法对冰冻切片质量的影响

摘要

冰冻切片技术是一种常用的兽医病理学检验技术，主要用于兽医临床快速诊断、脂肪染色及组织内抗原抗体反应或酶的检测。但兽医临床病理学诊断中，常常出现由于冰冻切片质量不佳而判断失误的情况。本试验为提高冰冻切片质量，以动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肌肉等为试验材料，利用常规组织学和冰冻切片技术，进行不同粘附剂、固定液及防冰晶法对冰冻切片质量影响的研究。结果表明:
　　1、不同粘附剂对固定组织冰冻切片质量的影响。经蛋白甘油、多聚赖氨酸、明胶硫酸铬钾三种粘附剂处理过的载玻片及从试剂公司购买的载玻片防脱片效果存在明显差异。经多聚赖氨酸处理过的载玻片的脱片率为0％，防脱片效果最佳，其次是明胶硫酸铬钾（脱片率为5％），而经蛋白甘油处理过的载玻片和从试剂公司购买的载玻片脱片率达66％和92％，防脱片效果较差。
　　2、不同固定液对新鲜组织冰冻切片质量的影响。六种固定液短时间固定对新鲜组织冰冻切片的制片效果及H.E染色效果的影响各不相同。其中乙醚酒精1∶1固定效果效果最好，其次是AAF固定液、4％多聚甲醛，而95％乙醇、中性福尔马林和AF固定液的效果差。
　　3、不同防冰晶法对新鲜组织冰冻切片质量的影响。不同防冰晶法均有去冰晶作用，但消除程度存在差异，其中液氮直接冷法和异戊烷处理25 s的异戊烷-液氮法效果最好，而蔗糖梯度脱水法和异戊烷处理20 s、30 s的异戊烷-液氮法效果均差。
　　由此可知，制作一张高质量的冰冻切片，应采用以下方法:固定组织冰冻切片时，采用多聚赖氨酸处理过的载玻片;制作新鲜组织冰冻切片时，采用乙醚酒精1∶1固定液固定及液氮直接冷却法或异戊烷处理25 s的异戊烷-液氮法防冰晶。

目录

声明

摘要

前言

1 冰冻切片技术的应用

2 冰冻切片技术存在的主要问题

2．1 固定组织冰冻切片脱片问题

2．2 新鲜组织冰冻切片固定问题

2．3 新鲜组织冰冻切片存在冰晶问题

3 冰冻切片技术主要问题的应对方法及原理

3．1 多聚赖氨酸防脱片及其原理

3．2 乙醚酒精1：1固定冰冻切片及其原理

3．3 液氮、异戊烷对新鲜组织去冰晶及其原理

4 冰冻切片与传统石蜡切片的比较

5 本试验研究的目的及意义

1 材料

1．1 试验材料

1．2 主要药品

1．3 主要仪器设备

1．4 药品的配制

2 方法

2．1 各脏器及肌肉组织的取材及固定

2．2 石蜡切片的制作及H．E染色

2．3 冰冻切片的制作及H．E染色

2．4 固定组织及载玻片防脱片处理

2．5 六种固定液对冰冻切片进行固定

2．6 对新鲜组织冰冻切片消除冰晶的处理

1 石蜡切片H．E染色结果观察

2 不同粘附剂对固定组织冰冻切片质量影响的结果观察

3．不同固定液对新鲜组织冰冻切片质量影响的结果观察

4．不同防冰晶法对新鲜组织冰冻切片质量影响的观察结果

4．1 蔗糖脱水法对新鲜组织冰冻切片质量影响的观察结果

4．2 液氮直接冷却法对新鲜组织冰冻切片质量影响的观察结果

4．3 异戊烷-液氮法对新鲜组织冰冻切片质量影响的观察结果

讨论

1 不同粘附剂对固定组织冰冻切片质量的影响

2．不同固定液对新鲜组织冰冻切片质量的影响

3．不同防冰晶法对新鲜组织冰冻切片质量的影响

结论

参考文献

致谢

作者简介

附录