基于DPO引物构建的六重PCR检测食品中常见致病菌的方法研究

摘要

目的基于DPO引物在多重PCR检测中的优点,构建一种六重DPO-PCR方法用于检测食品及食源性疾病样本中常见的6种致病菌。方法以霍乱弧菌的vcc、志贺菌的ipa H、单增李斯特菌的iap、副溶血性弧菌的gyr B、金黄色葡萄球菌的nuc以及沙门菌的omp C为靶基因,设计6对DPO引物,经过反应体系优化,建立了六重DPO-PCR方法。结果六重PCR反应体系内部DPO引物之间干扰小;扩增后除靶基因外的其他15种细菌DNA无扩增条带出现;对6种致病菌的最低检出限分别为:霍乱弧菌,220 cfu/ml;志贺菌,150 cfu/ml;单增李斯特菌,190 cfu/ml;副溶血性弧菌,190 cfu/ml;金黄色葡萄球菌,700 cfu/ml;沙门菌,960 cfu/ml。结论用DPO引物构建的六重PCR方法具有特异性强,退火温度范围宽,引物之间干扰小,电泳图谱背景清晰,可以达到一管6检的目的,为食品及食源性疾病样本快速准确检测提供了一种新的高通量的快速检测方法。