红花遗传转化受体系统的建立及转酸性成纤维细胞生长因子aFGF的初步研究

摘要

目的:将aFGF与红花的油体蛋白融合,转入红花中,直接通过提取红花油来实现红花与aFGF的双重功效。方法:以不同日龄的红花子叶为外植体,采取正交试验设计的方法,摸索出红花再生体系的最佳条件。然后通过农杆菌介导法将aFGF基因转入到红花中,对不同浓度的抗生素进行筛选,进行PCR鉴定,计算阳性率。结果:根据不同的激素配比,确定了红花分化的最佳培养基为MS+BA1.0 mg.L-1+NAA0.2 mg.L-1;生根的最适培养基为1/4 MS+NAA2.0 mg.L-1+IAA0.5 mg.L-1。3种不同种类和浓度的抑菌抗生素对红花浸染后的抑菌效果略有不同,结合抑菌效果,污染率,芽的分化率以及成本问题等因素的综合考虑,抑菌抗生素选择用Tim,质量浓度为400 mg.L-1即可抑制细菌的生长,同时有利于芽的分化;hyg的筛选压力则选择6 mg.L-1为它的临界浓度;对8棵转化植株进行鉴定,阳性率为25%。结论:通过器官发生途径,确定出红花分化与生根的最佳激素组合与配比,建立了红花的再生体系;确定出最适的抑菌抗生素与筛选抗生素的浓度;经过筛选获得的再生植株,通过PCR检测,部分扩增出aFGF目的基因,证实了aFGF基因整合到红花基因组中。这为红花作为植物生物反应器的研究奠定了扎实的基础。