他克莫司通过减少肾小球足细胞凋亡降低2型糖尿病大鼠尿白蛋白

摘要

目的探讨他克莫司降低2型糖尿病(T2DM)大鼠尿白蛋白的可能机制。方法高脂高糖饲料喂养8周联合低剂量链脲佐菌素腹腔注射构建T2DM大鼠模型,随机选取后分为糖尿病模型组(DM组,n=10)和他克莫司(FK506)治疗组(FK组,n=10),另设正常对照组(n=10)。FK组给予FK506灌胃干预8周,DM组、正常对照组给予等量枸橼酸缓冲液灌胃8周。干预前后测定各组大鼠肾肥大指数(肾质量/体质量,KM/BM)、收缩压、24h尿白蛋白/尿肌酐,空腹血糖、内生肌酐清除率(CCr),总胆固醇、三酰甘油、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和血白细胞;光镜、电镜观察肾脏病理改变;免疫组织化学方法测定nephrin蛋白表达;TUNEL法检测足细胞凋亡;Western blot法测定cleaved-caspase-3的表达和bax/bcl-2。结果与正常对照组相比,DM大鼠KM/BM、收缩压、空腹血糖、CCr、总胆固醇、三酰甘油及24h尿白蛋白/尿肌酐明显升高(均P<0.05),经FK506干预后大鼠KM/BM、24h尿白蛋白/尿肌酐明显降低(均P<0.05),而对收缩压、空腹血糖、CCr、ALT、AST和血白细胞的影响无统计学意义;光镜下,DM大鼠肾小球体积增大,系膜细胞增生,基底膜增厚;FK506干预后病理改变明显减轻;电镜下,DM组肾小球基底膜显著增厚,足突紊乱、融合率明显升高[(73.50±3.60)%比(4.20±1.91)%,P<0.05];经FK506干预后上述病变有所减轻,足突融合率下降[(33.80±1.93)%比(73.50±3.60)%,P<0.05];免疫组化结果显示,DM组肾组织nephrin蛋白表达较正常对照组下降,而FK506干预后nephrin蛋白表达明显恢复(P<0.05);TUNEL法检测发现DM大鼠足细胞凋亡明显增多(P<0.05),而FK506干预后足细胞凋亡明显减少(P<0.05);Western blot结果显示:DM组肾组织cleaved-caspase-3蛋白表达和bax/bcl-2较正常对照组上升(P<0.05),而FK组cleaved-caspase-3蛋白表达和bax/bcl-2明显降低(P<0.05)。结论他克莫司可以通过减少糖尿病肾病大鼠足细胞的凋亡而发挥降低24h尿白蛋白,延缓肾功能减退的作用。