大米过敏原球蛋白分离纯化及免疫鉴定

摘要

以食用大米为原料,采用NaCl盐溶法初步提取大米过敏蛋白,通过改变硫酸铵饱和度及最适pH值进一步纯化蛋白,提取的大米蛋白经SDS-PAGE蛋白凝胶电泳验证,最终可得到纯度约为90%的相对分子质量为(14.4~18.4)ku的蛋白样品,经蛋白质谱初步验证,该蛋白属于大米过敏蛋白。利用提取的该大米过敏蛋白腹腔注射BN大鼠,以磷酸盐缓冲溶液(PBS)为阴性对照,分别于致敏第14、21、35天内眦静脉取血检测血浆组胺释放水平,于42 d进行激发实验,观察大鼠全身主动过敏反应及体温变化。实验结果显示,与阴性对照组相比,实验组大鼠血浆组胺释放水平有较为明显的升高(P<0.05);激发前后实验组大鼠有明显的过敏反应,且体温骤变,有极为明显的差异(P<0.01)。经动物实验再次验证该大米蛋白属于大米致敏蛋白。