K562细胞TMS1基因去甲基化后NF-κB表达的变化

摘要

目的探讨甲基化诱导静止基因(TMS1)在慢性髓性白血病细胞系K562细胞中的甲基化程度及其与NF-κB的关系。方法选取6例正常人及非恶性血液病患者骨髓细胞作为骨髓细胞对照组,提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TMS1 mRNA表达;体外培养K562细胞,设空白对照组、0.5μmol/L地西他滨(DCA)实验组、1μmol/L DCA实验组。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测各组K562细胞TMS1基因甲基化程度;采用RT-PCR和Western blotting法检测各组K562细胞TMS1基因与NF-κB在mRNA及蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,光学显微镜下观察细胞形态变化。结果骨髓细胞对照组均可检测到TMS1 mRNA的表达,而K562细胞系中无TMS1 mRNA表达。MSP检测结果显示,空白对照组TMS1基因呈完全甲基化;TMS1基因去甲基化后NF-κB的表达下调,与空白对照组相比,其他两组细胞TMS1mRNA及蛋白表达均增高,而NF-κB表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的DCA对K562细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系。结论 TMS1基因在K562细胞中呈完全甲基化,其沉默表达可能会异常激活NF-κB途径,部分参与白血病的发生发展。