柴胡皂苷d对人肝细胞损伤的保护作用研究及抗肝纤维化机制探讨

摘要

目的观察柴胡皂苷d(SSd)对人肝细胞损伤的保护作用及抗肝纤维化机制,探讨L02细胞氧化应激损伤与细胞焦亡、上皮-间质转化(EMT)的关系,为SSd在治疗肝纤维化疾病的应用提供临床依据。方法体外培养人正常肝细胞L02,采用H_(2)O_(2)诱导L02细胞损伤模型,干预组加入中药单体SSd(低、中、高剂量组)孵育24 h后再经过H_(2)O_(2)处理细胞,CCK8法观察SSd干预的损伤L02细胞后的活力、丙二醛(MDA)水平、上清液谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测,Western Blot法、RT-PCR法检测细胞焦亡相关指标半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)及上皮间质转化(EMT)相关指标转化生长因子(TGF-β1)、钙黏附蛋白(Ecadherin)、波形蛋白(Vimentin)、肌劲蛋白(α-SMA)的表达。结果SSd能抑制L02细胞损伤引起的细胞活力下降,在有效剂量内无明显肝毒性(ALT、AST未见明显升高);与对照组比较,氧化应激损伤的L02细胞焦亡相关指标Caspase-1、IL-1β、IL-18表达明显升高(P<0.05,P<0.01),EMT相关指标TGF-β1、Vimentin、α-SMA的表达升高,Ecadherin表达下调(P<0.05,P<0.01);SSd干预后,Caspase-1、IL-1β、IL-18、TGF-β1、Vimentin、α-SMA的表达明显下调,Ecadherin表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论氧化应激损伤的L02细胞活力下降可能与细胞焦亡相关,SSd有抑制损伤的L02细胞焦亡、控制EMT过程,发挥抗肝纤维化的作用。