微囊藻毒素致大鼠肝细胞氧化损伤机制探讨及B族维生素联合维生素C的保护作用

摘要

目的： 应用分子生物学的技术，探讨微囊藻毒素对体外培养的肝细胞的损伤机制，并且对抗氧化营养素及B族维生素对微囊藻毒素染毒所致肝细胞的损伤的保护作用进行研究，为寻找肝脏保护与肝癌预防的有效方法提供参考。 方法： 1、购买BRL(大鼠肝细胞)细胞株，待增殖情况稳定，开始试验。 2、MC-LR染毒肝细胞，24小时后MTT法检测细胞增殖情况。 3、应用流式细胞仪检测毒素对细胞凋亡情况的影响。 4、根据正交设计结果，BRL预先加入维生素作用，24小时后加入MC-LR染毒，检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSHPX)。 5、RT-PCR：结合正交设计实验，筛选出有效的保护组合，通过逆转录PCR技术，测定目的基因PCNA和UDG在mRNA水平上的改变。 结果： 1、与正常组细胞相比，MC-LR在浓度低于1μg/ml时，促进BRL增殖，浓度为0.51μg/ml时，细胞增长达到峰值；MC-LR浓度高于1.25μg/ml时，抑制细胞增殖。 2、MC-IR染毒BRL后，细胞凋亡发生变化，当浓度在0.001～0.5 μg/ml范围，凋亡率逐渐增加，1～2.5μg/ml凋亡率逐渐减少。 3、与正常组细胞相比，不同浓度MC-LR作用下，PCNA表达量及LIDG表达量差异有统计学意义。当MC-IR浓度在0.01～1.0μg/ml范围内，PCNA表达量随MC-LR浓度的增加而增加，在MC-LR浓度达到1.25μg/ml时，PCNA表达量开始下降；UDG表达的变化趋势与PCNA一致。 4、正交分析结果显示：与没有维生素保护的染毒细胞相比，VitB6、VitB12、VC作用后，细胞内SOD、GSH-PX含量增加，差异有统计学意义，并且VitB12与VC存在协同效应。 5、在高浓度MC-LR干预下，与没有维生素保护的染毒细胞相比，维生素B6、B12+VC作用后，PCNA表达量升高，差异有统计学意义。B6、B12、B12+VC作用后，UDG表达量增加，差异有统计学意义。 在低浓度MC-LR干预下，与没有维生素保护的染毒细胞相比，维生素B6、B12作用后，PCNA表达量增加，差异有统计学意义；B6、VC、B12、B12+VC作用后，UDG表达量减少，差异有统计学意义。 结论： 1、MC-LR在不同浓度时对肝细胞增殖和凋亡的作用是不同的，在低浓度时有促进细胞增生的作用，凋亡率逐渐增加；在高浓度时却表现为抑制细胞生长或细胞毒作用的表现，凋亡率逐渐降低。 2、MC-LR通过影响BRL的PCNA.和UDG基因mRNA表达，启动BER修复途径，可能是BRL氧化损伤后的修复机制之一。 3.维生素VitB6、FA、VitB12、VC对MC-LR致BRL损伤有保护作用，其中，维生素一阶交互作用的最佳保护组合为：VitB12+VC。

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综述 微囊藻毒素消除的研究进展