基于实时无标记细胞分析系统的气道平滑肌细胞收缩舒张效应检测方法的建立

摘要

该研究利用实时无标记细胞分析系统(xCELLigence real-time cell analysis system,RTCA)建立气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)收缩舒张效应检测方法。筛选适宜细胞接种密度,接种于RTCA检测板中监测细胞动态生长曲线;利用组胺刺激细胞收缩,并计算组胺半数抑制浓度(IC50);在适宜组胺刺激浓度的基础上,利用特布他林模拟细胞舒张效应,并计算半数有效浓度(EC50)。结果显示,ASMCs为4000个/孔接种密度培养于(16±4)h区间内,符合后续实验需求;组胺作用ASMCs 2 h后的IC50为8.07 mmol/L,故选择8 mmol/L组胺刺激ASMCs可见较为明显的收缩效应;特布他林作用ASMCs 2 h后的EC50为8.08×10–8 mol/L,故浓度为10μmol/L和20μmol/L的特布他林可检测到明显舒张效应(P<0.05)。利用RTCA可以稳定、有效、可靠地检测ASMCs收缩舒张效应,为以ASMCs为主要研究对象的呼吸系统疾病提供参考数据和准确的检测方法。