强直性脊柱炎HLA-B27基因荧光定量诊断方法的建立

摘要

目的:建立一种强直性脊柱炎基因(HLA-B27)的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法:扩增强直性脊柱炎患者白细胞中的HLA-B27基因与质粒PGEM-TEasy Vector重组,转化大肠杆菌E.coli DH5α,获得克隆的HLA-B27基因标准模板。用DA7600 PCR仪检测FQ-PCR扩增产物制成标准曲线来定量检测标本中HLA-B27的浓度。结果:FQ-PCR扩增产物呈"S"形动力学曲线;ct(循环阈值)与PCR体系中起始模板拷贝数的对数值之间有较好的线性关系,显示了FQ-PCR定量的准确性。结论:FQ-PCR方法用于定量检测外周静脉血HLA-B27基因表达水平,具有较好的灵敏度、特异性,且操作简便、快速,易于普及,有良好的应用前景。