犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒三重PCR检测方法的建立

摘要

参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）和犬冠状病毒（CCV）的基因序列保守片段分别设计特异性引物,建立了可以同时检测CDV（684 bp）、CPV（213 bp）和CCV（417 bp）的三重PCR方法。特异性结果表明,所建立的体系只能扩增CDV、CPV、CCV,而不能扩增犬腺病毒Ⅱ型（CAV-Ⅱ）和犬副流感病毒（CPIV）;敏感性试验表明,该方法对CDV、CPV和CCV的最低核酸检测量分别为1.39×10^- 2、6.0×10^-2和6.7×10^-2 copies/L,其敏感性比普通PCR高100倍。采用建立的三重PCR方法对北京、山东地区收集的临床粪便样品进行检测结果表明,使用三重PCR体系的扩增结果与单项PCR扩增结果一致,符合率为100%。以上结果表明该方法快速、敏感、特异性强,对上述3种病毒能够进行快速鉴定诊断,为临床诊断提供了快速简便的方法。