空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-flhF和pGEX-6p-1-flhF,并融合表达rHis-FlhF和rGST-FlhF蛋白。筛选获得2株稳定分泌抗FlhF的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2C12和7A9,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1×109和2×107,Western blot法分析表明2株mAb均能与纯化蛋白rHis-FlhF有良好的反应性,Dot-ELISA试验表明2株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应。结论成功制备了具有较高特异性的空肠弯曲菌FlhF蛋白的mAb。