鹅星状病毒1型抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用

摘要

鹅星状病毒1型(GAstV-1)是雏鹅内脏和关节痛风的重要病原,严重危害我国养鹅业的健康发展。建立血清学方法可以快速、准确地检测出GAstV-1的感染,有利于对该病的防控。本研究通过大肠杆菌表达GAstV-1的衣壳蛋白VP70,以纯化的重组GAstV-1衣壳蛋白rVP70包被酶标板、通过棋盘滴定法对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标抗体稀释度以及各反应时间进行优化,建立检测GAstV-1抗体的间接ELISA。应用该方法对临床鹅血清样品进行了检测和分析。ELISA优化的条件是,抗原包被浓度2μg/mL、4℃包被12 h,以10%脱脂乳为封闭液,一抗血清最佳稀释度为1∶100,酶标抗体最佳稀释度为1∶6 000,一抗和二抗反应时间均为0.5 h;待检样本的样本OD_(450)值/阳性对照OD_(450)值(S/P)≥0.28判定为阳性。应用该间接ELISA对2021年江苏省各地区的180份临床鹅血清样本进行GAstV-1抗体检测,阳性率约65.5%。本研究应用rVP70蛋白为包被抗原建立的抗体检测方法可特异敏感地检出鹅感染GAstV-1,可为该病的临床防控提供技术支撑。