重组α-银环蛇毒素P22-A31的原核表达及功能分析

摘要

α-银环蛇毒素在神经科学研究以及在临床和制药上有重要作用,为获得大量的α-银环蛇毒素,我们用已构建的pGEX-BgTX(P22-A31)质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并用谷胱甘肽Sepharose FF纯化GST-α-银环蛇毒素融合蛋白,再用凝血酶切掉融合标签谷胱苷肽转移酶(Glutathione S-transferase,GST),得到了较纯的重组α-银环蛇毒素同工毒素,得率约为1.225 mg/L.用重组α-银环蛇毒素制备多克隆抗体,经ELISA 和Western杂交鉴定后可知重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素的抗原性一致.小鼠毒性试验表明,重组α-银环蛇毒素同工毒素的半致死剂量LD50为1.598 mg/kg,约为天然α-银环蛇毒素的1/5.小鼠化学法镇痛试验显示,重组α-银环蛇毒素有一定的镇痛药效,1/4 LD50剂量的镇痛百分率为55.2%,1/8 LD50剂量的镇痛百分率为20.5%,在外周镇痛作用中呈一定的量效关系.