利用N糖苷酶F对单克隆抗体N糖酶解条件的优化

摘要

为了优化利用N糖苷酶F(PNGase F)酶解单克隆抗体中N糖的方法,应用本公司生产的单抗对PNGase F酶的酶解条件进行优化,包括缓冲液pH、酶种类、仪器、酶解程度、变性缓冲液及酶加入量等,总结酶解条件对N糖谱结果的影响.结果显示,置换缓冲液至1×PBS中可以避免某些单抗在低pH酶解时G0F转化为G0F-GN并可改善峰型;快速PNGase F和加入变性缓冲液能有效提高酶解效率;UPLC和1.7μm粒径色谱柱能提高分离度;不完全酶解影响N糖含量结果.研究结果表明,采用优化的酶解条件可快速、有效的酶解单抗上的N糖,使N糖谱结果准确可靠,为细胞株筛选和单抗药物质量控制提供有效手段.