粪肠球菌β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质表征

摘要

N-乙酰氨基葡萄糖因其重要的功能活性而具有广阔的应用前景,β-N-乙酰氨基葡萄糖苷是酶法制备N-乙酰氨基葡萄糖领域一类重要的糖苷水解酶.从粪肠球菌(Enterococcus faecalis)基因组中克隆得到一个GH20家族β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因(EfNagase),并在大肠杆菌中进行了异源表达,研究了重组酶的酶学性质.序列分析发现EfNagase与已报道的Streptococcus pneumoniae TIGR4来源的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶序列相似度最高,为52.08％.对其酶学性质研究发现纯化后的EfNagase比活力为3606.10 U/mg,在温度50℃、pH 6.0的条件下活性最高,且在温度低于50℃、pH 3.5～11.5的范围内展现出较高的稳定性(残余酶活>90％).β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶是酶法制备N-乙酰氨基葡萄糖中重要的一类糖苷水解酶.研究发现EfNagase具有高酶活、高热稳定性和严格的底物特异性,在酶法制备N-乙酰氨基葡萄糖领域具有良好的应用潜力.