hTNFR1在大肠杆菌中可溶性表达及纯化

摘要

将人源肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(hTNFR1)基因克隆到pET-22b表达载体,成功构建了重组表达质粒pETH1,电转到Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株中进行摇瓶发酵.实现了hTNFR1在大肠杆菌表达系统中的重组表达.但目的蛋白全部以包涵体的形式存在于沉淀中.为了提高hTNFR1在大肠杆菌中的可溶性表达,融合标签和分子伴侣两种策略被实施用于辅助hTNFR1的可溶性表达.结果表明,在hTNFR1的N端融合NusA标签后,hTNFR1的可溶性有一定提高;在NusA-hTNFR1基础上,过表达了7种分子伴侣,筛选出tig分子伴侣对hTNFR1蛋白可溶性表达有明显的促进作用,可溶性表达量约占总量的90％;对优化后的hTNFR1表达系统的可溶性蛋白进行Ni-NTA亲和层析纯化后,TEV蛋白酶酶切去除N端的NusA标签,结合Western blot分析鉴定,获得了大量高纯度的hTNFR1蛋白.研究结果为进一步研究hTNFR1的生理学活性及其在疾病治疗方面的应用奠定了良好基础.