陆地棉体细胞胚胎发生过程中的mRNA差异显示分析

摘要

以未经诱导的棉花下胚轴、经愈伤诱导10d的下胚轴和胚性愈伤组织为材料,利用差异显示反转录-PCR(DDRT-PCR)技术对陆地棉体细胞胚胎发生过程中的cDNA差异表达进行了初步研究.反转录获得cDNA第一链,经3个锚定引物和随机引物的DDRT-PCR,产物经测序胶电泳分离,共得到约200个差异表达cDNA片段,其中51个为陆地棉胚性愈伤组织所特有,从中还获得相关基因上游或下游的调控系列,从其中一个样品中可成功分离、克隆24个cDNA片段.经Northern杂交验证,从获得的差异片段中找到了一个能稳定出现的阳性cDNA片段,该片段仅出现在胚性愈伤组织阶段.对该片段进行克隆、测序和序列同源性分析,发现该片段是一个功能未知的cDNA片段.