巨细胞病毒感染诱导肾素分泌作用的机制研究

摘要

cqvip:目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染肾素(Renin)分泌及促进病毒复制的分子作用机制。方法通过建立体外CMV感染球旁器细胞模型,应用钙调素依赖蛋白激酶(CaMK)和蛋白激酶C(PKC)的抑制剂,分为CMV感染组(CMV组)、CMV感染+CaMKⅡ抑制剂组(CMV+CaMKⅡi组)、CMV感染+PKC抑制剂组(CMV+PKCi组)和CMV假感染组(Mock组),通过realtime PCR技术检测Renin、CaMK、PKC、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和巨细胞病毒即刻早期基因1(CMV IE1)的表达。将CMV与As4.1细胞共育后的培养液与小胶质细胞(BV2)共培养,检测BV2细胞核因子κB(NF-κB)炎症信号通路的表达。结果CMV感染As4.1细胞后,肾素基因表达量在CMV组明显增高(P0.05);CaMKⅡ、PKC基因表达于CMV组、CMV+CaMKⅡi组和CMV+PKCi组三组间没有显著差异(P>0.05),但三组实验组均高于Mock组(P<0.05);PKA基因在CMV组和CMV+PKCi组中表达明显(P<0.05),与前两组相比,其在CMV+CaMKⅡi组中的表达低于前两组(P<0.05),以上三组均高于Mock组(P<0.05);CREB基因与CMV IE1基因表达趋势相同,均为CMV组明显增高(P<0.05),在CMV+CaMKⅡi组和CMV+PKCi组有轻微增高(P<0.05),同时CMV IE1基因表达CMV+CaMKⅡi组明显低于CMV+PKCi组(P<0.05)。检测BV2接种CMV感染As4.1细胞培养液后的蛋白表达,NF-κB磷酸化的表达水平CMV组明显升高(P<0.05),CMV+CaMKⅡi组和CMV+PKCi组轻度升高,但CMV+CaMKⅡi组表达明显高于CMV+PKCi组(P<0.05)。结论巨细胞病毒可激活CaMK和PKC,CaMK可间接活化腺苷酸环化酶激活蛋白激酶A(PKA),PKA/PKC进而激活CREB,CREB结合CMV和肾素基因上的CRE区促使病毒复制和肾素分泌;CMV与As4.1细胞共育产物可诱导小胶质细胞NF-κB蛋白高表达。