基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

摘要

目的 基于核转录因子kappaB(nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB)信号通路探讨脂多糖(lipopolysac-chandes,LPS)刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞炎症损伤以及疏肝健脾含药血清的保护作用.方法 通过体外培养以及免疫荧光鉴定SD大鼠肝细胞及Kupffer细胞,利用LPS刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞产生炎症反应,酶联免疫法检测肝细胞及Kupffer细胞培养上清液中白介素-1(interleukin-1,IL-1)、人血清淀粉样蛋白(serum amyloid A,SSA)的表达,Western blot法检测大鼠肝细胞及Kupffer细胞NF-κB通路相关蛋白的表达.结果 每只大鼠通过纯化后获得肝细胞数量1.5×108 ～2.0×108个,Kupffer细胞数量0.5×107～1.0×107个,Typan blue染色测定肝细胞及Kupffer细胞活力均可达到95％以上.LPS组肝细胞及Kupffer细胞较空白血清组IL-1、SSA水平均有显著升高(P＜0.01).而与LPS组比较,药物干预组可显著降低(P＜0.01).肝细胞、Kupffer细胞的蛋白表明,与空白血清组比较,LPS组肝细胞及Kupffer细胞NF-κB、IκB及磷酸化IKKβ蛋白表达均有显著升高(P＜0.01);与LPS组比较,疏肝健脾方药含药血清能显著下调肝细胞IκB及p-IKKβ蛋白的蛋白表达水平(P＜0.01),但NF-κB蛋白表达水平无显著差异(P＞0.05),疏肝健脾含药血清能下调Kupffer细胞NF-κB、IκB及p-IKKβ蛋白表达(P＜0.01).结论 疏肝健脾含药血清能够对LPS刺激大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤产生保护作用,其机制可能与NF-κB信号通路相关.