同步化法处理细胞后对病毒转染效率影响的研究

摘要

目的 探讨同步化法对反转录病毒转染软骨细胞效率的影响.方法 将构建并经过包装后的反转录病毒载体转染到经低温处理后的同步化兔膝关节软骨细胞,运用免疫荧光显微镜观察荧光显色,并用硝酸还原法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,并与非同步化转染组对照,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液中人白细胞介素-1受体(hIL-1Ra)的表达量,与非同步化的细胞上清液中hIL-1Ra的含量做空白对照.结果 酶切鉴定重组基因正确;免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色;同步化组上清液中NO含量为(145±3)μmol/L,非同步化组上清液中NO含量为(89±3)μmol/L;同步化组上清液中的hIL-1Ra的含量为(65±4)ng/L,明显高于非同步化组上清液中的hIL-1Ra的含量(41±3)ng/L(P＜0.05).结论 软骨细胞经同步化后能显著提高反转录病毒载体的转染效率.