大肠杆菌T蛋白PDH结构域的高效表达纯化与活性测定

摘要

目的构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T蛋白的预苯酸脱氢酶(PDH),为研究T蛋白双功能结构域CM和PDH的相互协同作用以及T蛋白抑制剂对其影响提供活性蛋白材料.方法利用pGEX高效融合表达系统将PDH与谷光甘肽疏基转移酶(GST)编码序列在表达宿主BL21实现高效表达,并利用对GST具有亲和作用的Glutathione Sepharose4B琼脂糖珠进行亲和层析以对其分离纯化.结果表达产物达菌体总蛋白的40％,可溶性目的产物得量为240 mg·L-1,利用亲和层析法纯化后纯度达92.5％,GST-PDH融合蛋白的PDH的比活为38 U·mg-1.结论本法成功构建高效表达PDH菌株,表达量高,纯化度高,GST-PDH酶活性正常,为进一步研究奠定基础.