SWI1蛋白的DNA结合结构域的溶液结构测定和出血毒素类整合素抑制剂结构域的克隆、表达纯化及结构和功能的研究

摘要

论文工作的重点是重要蛋白的结构域克隆,表达,纯化以及功能和结构的研究.123个氨基酸大小的SWI1 ARID结构域被成功地克隆,表达和纯化.利用NMR,这个结构域的溶液结构得到了测定.一种PⅢ型出血毒素的类整合素抑制剂结构域也得到了克隆,表达和纯化.同时对这个结构域的功能和结构进行了研究.第一章对两部分内容进行了综述.第一部分是对真核基因的转录调控,重点在近年来发现的辅助激活因子及辅助抑制因子的综述.第二部分是对生物大分子NMR的进展,主要是真核基因组中生物大分子NMR,蛋白质或者蛋白质复合物的溶液结构研究以及分子相互作用研究的一些了解.在第二章中,利用NMR波谱,酿酒酵母SWI1蛋白的ARID结构域（一种新的DNA结合结构域）的溶液结构得到了测定.SWI1蛋白是染色质调整复合物ySWI/SNF的一个亚单位.编码这个结构域的基因在大肠杆菌中得到克隆和表达.第三章的工作是关于一种PⅢ型蛇毒的类整合素抑制剂结构域的研究.

目录

第一章综述

第一部分：真核基因转录调控中的辅助激活因子和辅助抑制因子复合物

1.和RNA聚合酶Ⅱ转录机器作用或者本身就是RNA聚合酶Ⅱ转录机器的成分的辅助因子

2.修饰染色质的辅助因子

3.多激活子的协作的基因激活

4.转录辅助因子和癌症

5.转录辅助因子复合物的晶体和溶液结构

第二部分：蛋白质核磁共振方法

1.NMR在结构基因组中的应用

2.利用NMR测定蛋白质溶液三维空间结构

3.利用NMR研究复合物的结构

4.核磁共振波谱研究蛋白质-配基，蛋白质-核酸以及蛋白质-蛋白质的相互作用

参考文献

第二章SWI1蛋白ARID结构域(DNA结合结构域)的溶液空间结构的研究

第一部分：简介

1.Chromatin-remodeling复合物SWI/SNF

2.SWI1蛋白

3.ARID(AT-rich interaction domain)DNA结合结构域家族

第二部分：材料和方法

1.SWI1蛋白ARID结构域(DNA结合结构域)的克隆表达和纯化

2.SWI1蛋白ARID结构域的二级结构特性的光谱学研究

3.NMR光谱解析SWI1蛋白ARID结构域的三维溶液空间结构

4.DNA凝胶滞留实验

第三部分：结果和讨论

1.SWI1蛋白ARID结构域(DNA结合结构域)的克隆表达和纯化

2.SWI1蛋白ARID结构域的二级结构特性的光谱学研究

3.NMR波谱解析SWI1蛋白ARID结构域的三维溶液空间结构

参考文献

附表

第三章出血毒素acutolysin E的类整合素抑制剂结构域的克隆，表达，分离纯化以及光谱学性质和功能的研究

第一部分：简介

1.蛇毒金属蛋白酶/出血毒素

2.蛇毒出血毒素的出血机制

3.类整合素抑制剂结构域(Disintegrin-like domain)

第二部分：材料和方法

1.蛇毒蛋白类整合素抑制剂结构域的克隆

2.GST融合蛇毒蛋白类整合素抑制剂结构域(GST-DL)和His-tag蛇毒蛋白类整合素抑制剂结构域(HIS-DL)的表达和纯化

3.重组蛋白GST-DL和HIS-DL的血小板凝集分析实验

4.重组蛋白HIS-DL二级结构的光谱学研究

第三部分：结果和讨论

1.蛇毒蛋白类整合素抑制剂结构域蛋白(GST-DL和HIS-DL)的克隆，表达和分离纯化

2.纯化的重组蛋白GST-DL和HIS-DL的胶原诱导血小板凝集分析实验

3.纯化的重组蛋白HIS-DL二级结构的光谱学研究

4.讨论

参考文献

致谢

论文列表

附录