基于CFTR的H2受体调节剂高通量筛选细胞模型的构建

摘要

目的建立基于囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR)高通量筛选组胺H2受体(histocompatibility-2)调节剂的模型。方法应用RT-PCR、Western blot检测H2受体在Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中表达情况。采用脂质体转染获取同时表达CFTR和黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。荧光淬灭动力学实验检测细胞模型功能,判断该模型是否可以筛选H2受体的调节剂。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,FRT内源性表达H2受体。采用倒置荧光显微镜观察,证实成功构建同时表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性,可用于H2受体调节剂的筛选,且荧光斜率(slope)值与H2受体调节剂的浓度呈剂量依赖关系。结论成功构建基于CFTR高通量筛选H2受体调节剂的细胞模型。