免疫捕获PCR法快速检测大肠埃希氏O157∶H7的研究

摘要

目的建立两种免疫捕获PCR法快速检测E.coli O157∶H7,并探讨其灵敏度和特异性.方法运用免疫磁珠集菌(IMS)和抗体包被扩增管(mACT)两种方法富集待测样品中E.coli O157∶H7,再应用巢式PCR法检测编码E.coli O157∶H7 O抗原的rfbE基因,对13株E.coli O157菌和10株非E.coli O157菌进行检测.结果应用两种icPCR检测,所有E.coli O157∶H7和E.coli O157:NM菌株均为阳性结果,而其它包括与O157抗血清能交叉凝集的菌株检测结果均为阴性;对于含有4.8×102cfu/ml 以上浓度的E.coli O157∶H7菌悬液,两种方法,所有试验管都能检测到特异性扩增;并证实了这两种方法可用于检测鲜牛奶中E.coli O157∶H7,样品中E.coli O157∶H7的含量只要不少于101cfu/ml,经过6小时增菌均能检测出来.结论 IMS-icPCR和mACT-icPCR用于检测E.coli O157∶H7,是快速、灵敏且高特异的方法.