弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答

摘要

目的构建弓形虫主要速殖子表面抗原2(SAG2)编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2,并接种小鼠,分析其所诱导的免疫应答.方法以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段,约592个bp,将其插入真核表达载体pVAX1多克隆位点,构建重组质粒pVAX1-SAG2,并转化大肠杆菌JM109,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定.大量提取纯化重组质粒pVAX1-SAG2,50μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉,3周后加强免疫一次;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达,流式细胞仪测定T细胞亚群,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体.结果真核表达重组质粒pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合.RT-PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带;重组质粒pVAX1-SAG2免疫组CD+4细胞数为32.35±5.38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水(NS)二对照组(P＜0.01),后二者CD+4细胞数分别为19.65±4.21与17.84±1.59;免疫组CD+8细胞数为18.67±2.37,但与空质粒及NS对照组相比,差别不显著(P＞0.05).ELISA测定结果显示pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性 IgG抗体.结论构建成功SAG2真核表达重组质粒pVAX1-SAG2,其能在小鼠肌肉中转录表达,可诱导产生细胞免疫与体液免疫应答.