弓形虫SAG1真核表达质粒的体外表达及其诱导的细胞免疫应答

摘要

@@ 分析弓形虫SAG1基因真核表达质粒的体外表达及其诱导小鼠的细胞免疫应答.重组表达质粒pVAX1-SAG1瞬时转染vero细胞,Western blot法检测在细胞中的表达.将重组真核表达质粒pVAX1-SAG1及空质粒pVAX1于0周、4周分别经肌注免疫BALB/c小鼠;第8周杀鼠,取脾,分离淋巴细胞,分别经ConA和抗原刺激,用MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率;使用直接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞亚群进行测定;两组小鼠经弓形虫速殖子攻击感染,计算存活期.Western blot法分析转染细胞,发现存在弓形虫感染血清识别的26kDa的特异带,与理论值相符;抗原刺激小鼠脾T淋巴细胞发生增殖反应,免疫组与空质粒对照组间差异有显著性(P<0.05),但ConA刺激小鼠后,两组间差异无显著性(P>0.05);T细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+、CD8+T细胞数量均升高,免疫组与空质粒对照组差异均有显著性(P1<0.05,P2<0.05).弓形虫攻击感染,免疫组鼠的平均存活时间较空质粒对照组延长.真核表达质粒pVAX1-SAG1在vero细胞中获得表达,且能诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答.