幽门螺杆菌临床菌株2148 bp的cagA基因片段克隆、表达及免疫性鉴定

摘要

目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床菌株的cagA基因片段,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫原性.方法由于cagA基因核苷酸序列变异较大,选择序列相对稳定的2148bp为目的片段(cagA1).采用高保真PCR扩增幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中的目的片段cagA1,T-A克隆后测序.构建pET32a的cagA1片段表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白(rCagA1).采用Hp全菌抗体的Western blot鉴定rCagA1免疫反应性,免疫双扩散试验鉴定rCagA1免疫家兔的抗血清效价.结果 PCR获得预期大小的目的扩增条带.与文献报道比较,克隆的cagA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%.所构建的原核表达系统pET32a-cagA1-E.coli BL21DE3目的重组蛋白(rCagA1)表达量为细菌总蛋白的30%左右.Western blot证实rCagA1能与Hp全菌抗体发生特异性免疫结合反应.兔抗rCagA1血清的免疫双扩散效价为1∶4.结论本文成功地构建了Hp cagA基因片段cagA1的高效原核表达系统,所表达的rCagA1具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研制cagA及其抗体检测试剂盒奠定了基础.