幽门螺杆菌临床菌株hpaA基因的克隆和表达及鉴定

摘要

目的 :克隆幽门螺杆菌 (Hp) hpa A基因 ,构建 hpa A基因表达载体 ,鉴定其表达的融合蛋白免疫性。方法 :采用高保真 PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株 Y0 6中扩增 hpa A基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列 ,构建p ET32 a的 hpa A表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达 ,采用 Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果 :所克隆的 hpa A基因与报道的相应核苷酸序列同源性为 94 .2 5 %～ 97.32 % ,氨基酸序列同源性高达 95 .38%～ 98.4 6%。p ET32 a- hpa A- BL2 1DE3系统的Hpa A融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的 4 0 %左右。Hpa A融合蛋白能与 Hp全菌抗体发生结合反应 ,免疫家兔能获得高效价抗体。结论 :本研究成功地构建了 Hp hpa A高效表达系统 ,所表达的 Hpa A融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性 ,可作为 Hp疫苗的抗原。