粉尘螨Ⅱ类抗原(Der f 2)的cDNA克隆测序及亚克隆

摘要

目的获得粉尘螨Der f 2 cDNA克隆及亚克隆,并进行测序.方法设计合成引物,从粉尘螨螨体中提取RNA,经RT-PCR获得cDNA,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD-18T,转化大肠杆菌E.coli JM109,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序,将PCR筛检阳性重组子及pET-32a(+)表达载体分别用SacⅠ和NotⅠ双酶切,连接转化至E.coli Competent Cell JM 109中过夜培养,挑选菌落进行酶切鉴定.结果从粉尘螨基因组RNA中扩增出Der f 2 cDNA片段,成功构建pET-32a(+)-Der f 2亚克隆,酶切产物的大小与预期相符.结论成功地对粉尘螨Der f 2 cDNA进行体外扩增并构建pET-32a(+)-Der f 2亚克隆.