粉尘螨2类变应原(Der f2)的cDNA克隆、序列分析和亚克隆

摘要

目的:获得中国大陆地区粉尘螨2类变应原(Der f2)的cDNA克隆,为进一步表达重组Der f2变应原用于尘螨过敏性疾病的诊断和治疗打下基础。方法:挑取活的粉尘螨经-70℃冷冻后提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der f2基因,克隆至pMD18-T Simple平滑载体中测序,并将其亚克隆至pET-32a(+)载体中。结果：筛选出2株长度为436bp的Der f2 cDNA片断,核苷酸序列一株与Genebank上的Derf2序列(D10448)碱基有6处不同,同源性为98.6％;另一株有2处不同,同源性为99.7％。结论：粉尘螨2类变应原的基因序列具有多态性,我们获得的中国大陆地区Der f2的cDNA克隆片断与Genebank上公布的Der f2序列高度同源。