结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定

摘要

目的表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体.方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段,将其插入原核表达质粒pQE30,构建重组质粒pQE30-icl.将pQE30-icl转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的基因表达.Western-blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变,但均为无义突变.在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS-PAGE分析约为47 kDa.免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应.纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为16.7u/mg.双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为1:32. 结论研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础.