肺炎链球菌自溶酶蛋白抗原表位的预测、克隆及重组表达

摘要

目的 用生物信息学的方法预测肺炎链球菌自溶酶蛋白(LytA)可能的抗原表位,合成带有linker(Gly4Ser1)3序列的融合基因片断(l1l2),并在原核系统表达.方法 利用多种生物信息学软件,在二级结构预测抗原表位分值的基础上结合单参数分析结果,预测并设计LytA可能的重组抗原表位(L1L2).扩增该表位基因1112,利用分子克隆技术构建重组质粒.经测序鉴定后,转入宿主菌JM109中原核表达L1L3多肽片断与载体标签蛋白还原性谷胱苷肽(GST)的融合蛋白GST-L1L2.结果 预测表明序列2～28(EINVSKLRTDLPQVGVQPYRQVHAHST)、序列98～112(FMTDYRLYIELLRNL)分别为可能的B细胞和T细胞抗原表位.用PCR技术合成了l1l2片段,构建重组质粒pGEX-4T-1-l1l2,成功转化大肠杆菌JM109.结论 经测序验证成功构建了重组质粒pGEX-L1L2,并转化大肠杆菌JM109,SDS-PAGE分析显示该重组质粒在原核系统中得到了表达,为后继多肽疫苗研究奠定了基础.