福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达

摘要

目的 对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础.方法 参考福氏志贺菌2a acrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列.以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α.提取重组质粒pMD18-acrA,经BamH I/Sal I双酶切并与载体pET30a 连接后转化宿主菌 BL21(DE3)pLys,通过IPTG 诱导表达目的 蛋白.结果 克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同.原核表达经SDS-PAGE 及 Western Blotting 检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白.结论 成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础.