荧光定量PCR技术用于模拟临床标本单增李斯特菌检测的研究

摘要

目的 利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术,建立针对模拟临床标本中单增李斯特菌快速检测方法 .方法 以单增李斯特菌特异性基因hlyO的部分片段作为靶基因,克隆到pMD18-T载体,制作标准曲线,以确定方法 的检测下限.利用各种血清型单增李斯特菌以及常见致病菌(如副溶血弧菌、霍乱弧菌、沙门菌、O157∶H7大肠杆菌等)验证引物探针的特异性,通过制备模拟粪便和血液感染标本,直接提取DNA进行检测,以达到快速检测的目的 .结果 采用real-time PCR技术对模拟临床标本检测结果 显示,只有单增李斯特菌有荧光信号,其他常见致病菌以及李斯特菌属中的无害李斯特菌均没有荧光信号;由标准曲线可知该方法 可以检测到22copy/反应管的目的 基因,而粪便中6.35×103CFU/g和血液中7.0×102CFU/ml的细菌含量即可被检出;粪便标本在2h内可出报告,血液标本1.5h即可出报告.结论 以hlyO为靶基因的Real-time PCR单增李斯特菌的检测技术具有特异性好、敏感性高、快速易操作等优点,可用于临床标本的快速诊断、疾病监测和疫情暴发的病原调查.