猴B病毒囊膜糖蛋白gD基因的克隆表达及其诊断价值评价

摘要

目的 克隆表达猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段,评价其诊断价值,为猴B病毒快速鉴别诊断技术建立和疫苗研制奠定基础.方法 利用PCR扩增gD胞外区基因片段,测序正确后插入原核表达载体pET28b(+).重组质粒转化至大肠杆菌(BL21)DE3并进行诱导表达.纯化蛋白首先以His抗体和B病毒阳性血清进行鉴定,再用ELISA评价其诊断价值.结果 目的 蛋白为包涵体,占菌体总蛋白的35%,分子量约为48 kD.Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;32份标准阳性血清和30份阴性血清的ELISA检测结果显示,该蛋白的检出率分别为93.75%和100%.结论 重组猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段具有良好的反应原性,可作为猴B病毒血清学检测的候选抗原.