西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及间接ELISA方法的建立

摘要

目的 建立西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)抗体检测方法.方法 人工合成了WNV NY99株E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)基因序列,构建了重组表达载体PET-28a-DⅢ.结果 重组质粒转化BL21宿主菌后诱导表达,SDS-PAGE分析表明,表达产物相对分子量17 kD,以包涵体形式存在.对表达产物作变性和复性及纯化处理,Western-blot鉴定结果表明,纯化产物可被WNV血清识别.将纯化重组蛋白包被酶标板,优化间接ELISA反应条件,抗原最佳包被浓度为3.75 μg/mL、血清最佳稀释度为1∶1 600、酶标二抗最佳稀释度1∶6 000、阴阳血清临界值为0.148.特异性、敏感性及重复性试验结果表明,本方法特异性强、敏感性高、重复性良好.结论 本研究为WNV感染的血清学诊断提供了技术储备.