裂谷热病毒Gn蛋白主要抗原区的表达、纯化及抗原性分析

摘要

目的 通过原核表达系统制备裂谷热病毒Gn片段主要抗原区蛋白,获取纯化蛋白,并分析抗原性.方法 将合成的裂谷热Gn基因用PCR的方法扩增具有保护性抗原表位的两段Gn1和Gn2,并将其定向插入原核表达质粒pColdⅠ中,构建重组表达质粒pCold Ⅰ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2,并将重组质粒转化到BL21 (DE3)感受态中,以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白和表达量,并利用His-tag Ni柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白.结果 所构建的质粒pColdⅠ-Gn1和pCold Ⅰ-Gn2序列正确,SDS-PAGE检测到目的蛋白,Western-blot显示截断的Gn蛋白具有很好反应原性.结论 成功纯化了裂谷热病毒Gn主要抗原区的表达蛋白.