CRISPR/Cas9介导敲除小鼠成纤维细胞MMP-2基因

摘要

MMP-2 与蹄叶炎的发生密切相关。本试验通过 http://chopchop.cbu.uib.no/网站设计MMP-2的sgRNA,将sgRNA的合成物连接到经Esp3I限制性内切酶切割的lenticrispr v2载体上,构建完整敲除载体;并将该载体转染到小鼠成纤维细胞中,通过 Western Blot 检测 MMP-2 蛋白表达量。经菌液 PCR鉴定和PCR产物测序表明载体构建成功;Western Blot结果显示,基因敲除组的MMP-2蛋白表达量明显降低,表明成功敲除小鼠成纤维细胞中 MMP-2 基因。为进一步在细胞层次研究 MMP-2 基因对蹄叶炎作用及机理提供了条件。