荷斯坦奶牛IFN-α基因的克隆表达和抗病毒活性分析

摘要

本研究通过PCR从荷斯坦奶牛基因组DNA中克隆了IFN-α(BoIFN-α)基因,PCR产物双酶切后与载体PQE30连接,构建重组质粒PQE30/BoIFN-α,进行测序和诱导表达.测序结果表明,荷斯坦奶牛IFN-α基因全长为498个核苷酸,含一个ORF,编码166个氨基酸的成熟蛋白, 与所报道的BoIFN-αA亚型只存在一个点变异.表达产物经SDS-PAGE和 Western blot分析,表达出20KD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的22%,表达产物以包涵体形式存在,约占沉淀蛋白的32%.包涵体提取物经尿素变性、透析复性后初步纯化,重组牛IFN-α(rBoIFN-α)初提物在牛肾细胞(MDBK)/水泡性口炎病毒(VSV)和鸡胚成纤维细胞(CEF)/VSV细胞系上的活性分别为和1.0～2.3×106 U/mg和1.3～2.6×105 U/mg,对传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)感染有一定的抑制作用,抗病毒活性为7.8×105 U/mg.结果显示大肠杆菌可以高效表达具有生物学活性的rBoIFN-α.