猪圆环病毒2型ORF-2全基因重组腺病毒的构建与鉴定

摘要

扩增猪圆环病毒2型的ORF-2全基因(702 bp),将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5 CMV K-NpA连接,构建重组穿梭质粒CMV-ORF-2.将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶PacI线性化后共转染293T细胞,进行细胞内重组.7～15 d后获重组腺病毒rAd5 CMV-ORF-2与对照组重组腺病毒rAd5 CMV-GFP.使用293细胞进行病毒增殖,对增殖稳定的rAd5 CMV-ORF-2进行鉴定;rAd5 CMV-ORF-2 TCID50为107.5/50 μL,用该代次rAd5 CMV-ORF-2进行PCV-2阳性血清中和试验,结果表明,重组腺病毒成功,PCV-2阳性血清不能中和重组腺病毒.